Laporan Laboratorium Aktivitas Enzim Amilase

     A.   Tujuan

Mengetahui aktivasi amilase dalam saliva

     

     B.   Prinsip

Prinsip menentukan faktor yang berpengaruh aktivitas amylase

Ptialin (saliva amilase) berperan dalam strach (amilum), memproduksi serangkaian produk : amylodextrin, erithrodextrin, acrodextrin dan maltose. Aktivitas dari saliva amilase meningkat apabila ditambahkan ion chloride. Saliva amilase berperan pada 1,4-glucosidic yang berkaitan dengan amilase dan amilopectin. Iodin berperan sebagai indikator. Warna biru tua mengidentifikasi adanya starch, warna kuning menandakan tidak adanya starch, setelah dihidrolisis oleh amilase.

Material:

1.        Starch 1%

2.      Sodium chloride 1%

3.        Sodium chloride 0.1%

4.      Sodium chloride 1N

5.        Idodin 0,01 M

6.       Aquades

7.      Saliva

Mengumpulkan saliva:

Setelah membasuh mulut dengan air, kunyah permen karet. Hal ini akan menstimulat aliran saliva. Mentransfer saliva ke beaker, dan digunakan untuk experiment.

Cara kerja menentukan faktor yang mempengaruhi aktivitas amylase:

1.        Masukkan 3ml dari 1% starch kedalam tabung reaksi, tambahkan 1ml aquades dan 1ml dari saliva dan tambahkan 3 tetes dari 0.01M iodin, catat perubahan warna. Tempatkan tabung reaksi kedalam water bath pada suhu 37^oC selama 10 menit. Catat perubahan warna.

2.      Masukkan 3ml dar.i 1% starch kedalam tabung reaksi, tambahakn 1ml dari sodium chloride 5% dan 1ml dari saliva, tambahkan 3 tetes dari 0,01M iodin, catat perubahan warna. Tempatkan tabung reaksi kedalam water bath pada suhu 37^oC selama 10 menit. Catat perubahan warna.

3.        Masukkan 3ml dari 1% starch kedalam tabung reaksi, tambahkan 1ml sodium chloride 0,1% dan 1ml dari saliva, tambahkan 3 tetes dari 0,01M iodin, catat perubahan warna. Tempatkan tabung reaksi kedalam water bath pada suhu 37^oC selama 10 menit. Catat perubahan warna.

4.      Masukkan 3ml dari 1% starch kedalam tabung reaksi, tambahkan 1ml sodium chloride 1% dan 1ml dari saliva, tambahkan 3 tetes dari  0,01M iodin. Catat perubahan warna. Tempatkan tabung reaksi kedalam water bath pada suhu 37^oC selama 10 menit. Catat perubahan warna.

5.        Ambil 1ml saliva kedalam tabung, panaskan ke dalam water bath 75 C selama 10 menit. Tambahkan 3ml dari 1% starch, 3 tetes dari 0,01M iodin. Catat perubahan warna.

6.       Ambil 1ml saliva kedalam tabung, tempatkan tabung kedalam freezer (18-20 C) selama 10menit. Tambahkan 3ml 1& starch dan tambahkan 3 tetes dari 0,01M iodin, catat perubahan warna. Masukkan kembali kedalam freezer (18-20 C) selama 10 menit. Catat perubahan warna.

7.      Masukkan 3ml 1% starch kedalam tabung reaksi, tambahkan 1ml saliva dan 3 tetes asam asetat 1M, tambahkan 3 tetes 0,01M iodin, catat perubahan warna. Tempatkan tabung reaksi kedalam water bath 37 C selama 10 menit. Catat perubahan warna.

8.       Masukkan 3ml 1% starch kedalam tabung reaksi, tambahkan 1ml saliva dan 3 tetes asama hidrochloride 1M, tambahkan 3 tetes dari 0,01M iodin, catat perubahan warna. Tempatkan tabung kedalam water bath 37 C selama 10 menit. Catat perubahan warna

No 2-4, pengaruh dari kofaktor (NaCl)

No 5-6, pengaruh dari temperature

No 7-8, pengaruh dari pH

Tambahan :

Tabung nomer 5 : setelah enzim di panaskan pada tahap pertama belum semua enzim terdenaturasi. Setalah di tambah amilum tidak langsung di panaskan kembali, akhirya enzim yang belum terdenaturasi bekerja sebelum di panaskan

Tabung nomer 6 : setalah enzim didinginkan kembali, akibatnya sampel tersebut menyesuaikan diri dengan suhu ruangan yang mengakibatkan enzim bekerja

Tabung nomer 7 : sempel yang telah di tambah co faktor dan amilum tidak di kocok terlebih dahulu pada saat akan di sesuaikan dalam suhu ruangan, akibatnya perubahan tidak jelas dan tidak merata.

Laporan Laboratorium Pengukuran Blood Urea Nitrogen (BUN)

A.   Tujuan

Untuk mengidentiikasi ada tidaknya kadar urea cukup dalam urin.

B.   Prinsip Kerja

Pada analisis, katalisis urease hidrolisis dari urea menjadi NH₃ dan CO_2. Amonia diubah menjadi, warna yang muncul indhepenol blue dari sodium nitroferricianida-fenol dan hypoclorite reagents.

C.   Alat dan Bahan

·          Kuvvet

·          Parafilm

·          Pipet Mikro (10 µL dan 1000µL)

·          Spektofotometer

·          Serum

·          larutan standar

·          larutan urease

D.  Prosedur

Darah sample

1. Menyiapkan kuvvet dan memasukan reagen 1000µL ke dalam kuvvet tersebut dengan menggunakan pipet mikro 1000 µL;

2. Menetesi 10 µL serum ke dalam kuvvet tersebut menggunakan pipet mikro 10µL;

3. Menutupi kuvvet tersebut dengan parafilm;

4. Kocok kuvvet tersebut dan simpan selama 1 menit;

5. Masukan kuvvet ke dalam spektofotometer;

6. Catat hasil yang muncul pada display spektofotometer, mengeluarkan kuvvet dari alat tersebut;

7. Hitung selama 1 menit dan masukan lagi ke dalam spektofotometer;

8. Catat hasil yang muncul pada display spektofotometernya.

Darah standar

1. Menyiapkan kuvvet dan memasukan reagen 1000µL ke dalam kuvvet tersebut dengan menggunakan pipet mikro 1000 µL;

2. Menetesi 10 µL larutan urease dalam kuvvet tersebut menggunakan pipet mikro 10 

    µL;

3. Menutupi kuvvet tersebut dengan parafilm;

4. Kocok kuvvet tersebut dan simpan selama 1 menit;

5. Dimasukan kuvvet ke dalam spektofotometer;

6. Catat hasil yang muncul pada display spektofotometer, mengeluarkan kuvvet dari alat tersebut;

7. Hitung selama 1 menit dan masukan lagi ke dalam spektofotometer;

8. Catat hasil yang muncul pada display spektofotometernya

a.    Kalkulasi :

Urea (mg/dl) :

b.    Conversi :

Urea  × 0.467 = BUN (mg/dL)

E.   Hasil

o   Absorbansi sample             : 0,11 A     A_₁1

o   Absorbansi standar            : 0,26 A     A₂

Kalkulasi:

Urea= ∆Asample : ∆Astandar x standard(mg/dl)

         =0,011 : 0,26 x 50

         =21,15

BUN = Urea x 0,467

         =  21,15 X 0,467

         =9,8 (normal)

F.    Kesimpulan

BUN pasien rendah, karena range normal BUN adalah antara 8 – 21 mg /dL.

Laporan Laboratorium Tes Kualitatif Badan Keton di Urin dengan Rothera’s Nitroprusside Test

A.   Tujuan

Untuk menunjukan adanya badan ketondalam urin.

B.   Prinsip

·       Sodium nitroprusside dalam suasana asam akan pecah menjadi Na₄Fe(CN)₆NaNO₂dan Fe(OH)₃ yang merupakan oksidator kuat.

·       Badan keton akan dioksidasi membentuk kompleks berwarna ungu.

·       Agar kompleks stabil, diberikan larutan penyangga (NH₄)₂SO_4.

C.   Prosedur

1.      Campurkan + 5 mL urin dengan serbuk Rothera sebanyak sepucuk ujung spatula, lalu dikocok.

2.        Tambahkan sedikit sodium nitropusside beberapa tetes, tanpa dikocok.

3.          Tambahkan beberapa tetes amoniak pekat, tanpa dikocok.

4.   Amati. Jika timbul cincin warna ungu antara perbatasan cairan, maka dalam urin terdapat badan keton.

D.  Hasil

Urin	Urin + serbuk Rothera + sodium nitropusside + amoniak pekat
Urin X	Tidak terbentuk cincin berwarna ungu
Urin Sample	Terbentuk cincin berwarna ungu

E.   Kesimpulan

Tes Rothera menunjukan hasil positif, artinya urin pasien terdapat badan keton yang dapat dilihat dari adanya cincin berwarna ungu antara perbatasan cairan.

Laporan Laboratorium Tes Kualitatif Badan Keton di Urin dengan Gerhardt’s Ferric Chloride Test

A.   Tujuan

Untuk menunjukkan adanya badan keton dalam urin.

B.   Prinsip

Memastikan reaksi yang belum diketahui, memungkinkan asam asetoasetat dari oksidasi oleh FeCl₃ menghasilkan warna merah kecoklatan.

C.   Prosedur

1.     Ditambahkan larutan ferric chloride (FeCl₃) 100 g/L setetes demi setetes ke sedikit urin segar yang ada dalam tabung reaksi.

2.        Warna akan menjadi kecoklatan setelah diberi asam asetoasetat.

3.   Apabila terdapat jumlah phosphate yang sangat banyak, maka akan timbul lapisan endapan yang menghasilkan ferric phosphate. Endapan ini perlu disaring.

4.        Setelah disaring tambahkan ferric chloride dan amati kembali.

5.         Jika warna urin masih coklat pekat maka itu berarti terdapat badan keton, sedangkan jika warna berubah menjadi lebih muda maka berarti tidak terdapat badan keton atau kadar badan keton tidak banyak.

D.  Hasil

Urin	Urin + FeCl3	Filter + Urin + Pemanasan + FeCl3
Urin X	Kuning bening	Coklat bening
Urin Sample	Coklat keruh	Coklat keruh

E.   Kesimpulan

Tidak dihasilkannya warna merah kecoklatan menandakan tidak adanya asam asetoasetat dalam urin sample. Hal ini dikarenakan tes Gerhardt hanya spesifik untuk asam asetoasetat saja.

Laporan Laboratorium Pemeriksaan Asam Urat dalam Darah

A. Pendahuluan

          Asam urat merupakan produk akhir katabolisme purin. Asam urat sendiri tidak dapat larut dalam air dan dapat membentuk kristal, batu, atau kalkuli. Sehingga meningkatnya kadar asam urat sering dikaitkan dengan gout. Kadar asam urat pada perempuan normal adalah 6 dan lelaki normal adalah 7.

B. Alat dan Bahan:

            1. Benecheck UA meter

           2. Strip

            3.  Sample darah

C. Cara Kerja

            1. Dikalibrasi alatnya terlebih dahulu.

           2.  Mengambil sampel darah pasien.

            3. Ditetes sampelnya pada alat.

           4. Dipasang strep pada alat.

            5.  Dilihat hasil dari alat tersebut.

D. Hasil Percobaan

          Dengan cara mengambil sampel dari beberapa pasien, terdapat hasil pasien yang melebihi dari angka normal dan ada beberapa pasien yang memiliki hasil yang normal.

E. Kesimpulan

          Makanan mempengaruhi kadar asam urat pada darah. Oleh karena itu, untuk mengontrol kadar asam urat pada darah sebisa mungkin untuk menekan atau memperkecil konsumsi makanan yang mengandung purin yang tinggi.