Laporan Laboratorium Tes Methemoglobinemia atau Methemoglobin dalam Darah

A.   Tujuan

Untuk mengetahui konsentrasi methemoglobin dalam darah.

B.   Prinsip

Methemoglobin dapat ditentukan dengan menggunakan spektrofotometri dengan panjang gelombang 630nm setelah ditambahkan cyanide didalam darah. Cyanmethemoglobin tidak akan terabsorbansi dengan spektrum 630nm. Perbedaan dalam absorbansi dapat menentukan methemoglobin. Penambahan dari potassium ferrycyanide akan merubah semua hemoglobin menjadi methemoglobin. Absorbansi setelah dan sebelum dari penambahan cyanide akan menentukan konsentrasi methemoglobin.

C.  Materials

1.     K₃Fe(CN)₆

   Dimasukan 2gr K₃Fe(CN)₆ kedalam 10ml aquades. Simpan didalam botol  dengan suhu 4⁰C.

2.   KCN

     Dimasukan 500mg KCN kedalam 10ml aquades. Beri label ‘poision’

3.     Buffer K. Phosphat 0.15 mol/l. pH 6.6 (20⁰C)

   Dimasukkan 17.1 gr K₂HPO₄.3H₂O (13.2 gr anhydrid) dan 10.2 gr K₂HPO₄ terpisah dalam 500ml aqudes.

  

D.  Methode

1. Tambahkan 0.1ml darah segar kedalam tabung yang sudah terisi 3,9ml aquades. Campur dan kocok tabung tersebut.

2. Tambahkan 4ml K-phosphate buffer, campur dan kocok merata.

3. Siapkan kuvet kosong dengan 1.5ml buffer phosphate + 1.5 aquades, beri label C₁.

4. Ambil setiap 3ml hemolisate (dari point 2), simpan dalam 2 kuvet dan beri label C₂ dan C_3.

5. Tambahkan 0.1ml K₃Fe(CN)₆ ke C₃. Tutup dengan parafilm, campur dan kocok dengan cara bolak-balik 3x. Tinggalkan kuvet diruangan selama 2menit sebelum diabsorban.

6. Baca absorban dengan panjang gelombang 630nm dari kuvet C2 dan C3 tanpa diikutsertakan C1.

C2 ---->  A2a

C3  ---->  A3a

7. Tambahkan 0.1ml KCN kedalam kuvet C1, C2 dan C3, tutup dengan parafilm dan campurkan dan kocok bolak-balik 3x. Biarkan 5menit sbelum diabsorban.

8. Baca lagi absorban dengan panjang gelombang 630nm dari C2 dan C3 tanpa diikutsertakan C1.

C2 ---->  A2b

C3  ---->  A3b

9. Penghitungan:

Methemoglobin (% dari total Hb) = 100 x A2b – A2a

                                                                        A3b – A3b

Keterangan :

A2a : kuvet kedua yg dibiarkan selama 2menit dan tidak ditambahkan K₃Fe(CN)₆

A2b : kuvet ketiga yg dibiarkan selama 5menit dan  ditambahkan KCN

A3a : kuvet kedua yg dibiarkan selama 2menit dan sudah ditambahkan K₃Fe(CN)₆

A3b : kuvet ketiga yg dibiarkan selama 5menit dan ditambahkan KCN.

E. Hasil

A2a = 1,463             A2b = 1,485

A3a = 1,173               A3b = 1,342

Methemoglobin (% dari total Hb) = 100 x A2b – A2a

                                                                       A3b – A3a

                                           = 100 x 1,485 – 1,463

                                                         1,342 – 1,173

                                           = 100 x 0,022

                                                         0,169

                                           = 0,13 % MtHb

F. Kesimpulan

Kesimpulannya bahwa pada sampel darah yang kita periksa positif terkena methemoglobinemia karena kadar methemoglobin dalam darah tinggi mencapai 768,18 MtHb, sedangkan methemoglobin normal di darah kita kurang dari 1,0 %.